备注:
a)检材提取室/解剖室应定期制备控制样品,确保环境中无硅藻污染源;
b)控制样品制备、检材提取所使用的实验耗材(5.1.2)均为一次性使用,避免交叉污染;
1 器官组织的取样
1.1 肝脏的取样
a)准备好一次性塑胶手套、一次性手术刀、一次性镊子、一次性解剖垫袋等工具;切除肝脏表面组织;
b)换手术刀、镊子,切取约10g深部组织,分三次取完,每次称重约3g,分别放置塑料试管中;
c)填写硅藻检验实验室检材信息表留档。
1.2 肾脏的取样
a)准备好一次性塑胶手套、一次性手术刀、一次性镊子、一次性解剖垫袋等工具;沿肾外缘纵向切开包膜,剥离;
b)换手术刀,切取约10g深部组织,分三次取完,每次称重约3g,分别放置塑料试管中;
c)填写硅藻检验实验室提取信息表留档。
1.3 肺脏的取样
a)准备好一次性塑胶手套、一次性手术刀、一次性镊子、一次性解剖垫袋等工具;切除肺表面组织;
b)换手术刀,切取约1.5g深部组织,放置塑料试管中;
c)填写硅藻检验实验室检材信息表留档。
1.4 骨髓的取样
a)刮净骨骼上的软组织和骨膜;
b)用纯水冲洗骨骼3次;
c)锯开骨干,用手术刀去除与锯片接触的骨髓组织;
d)用刮匙刮取全部骨髓组织,置塑料盒(或塑料袋、塑料试管)中;
e)取约10g骨髓组织,分三次取完,每次称重约3g,分别置塑料试管中;
f)填写硅藻检验实验室提取信息表留档。
1.5 水样的取样
a) 将水样摇匀,取10mL~100mL水样置塑料试管中。
2、硅藻提取-微波消解
2.1 器官组织的消解
a)分别将取样的检材(肝、肺、肾等)放入单独的100ml微波消解罐内,同时各自添加硝酸8ml,30%过氧化氢溶液2ml。密封好微波消解罐放入反应转子罐架。(建议选择肺对应的消解罐作为主反应罐)
b)用两只手端起已组装好的反应转子,使转子上板上的箭头指向正前方,使转子底板下的万向脚轮搁在炉腔上。
c)将反应转子向里推到底后稍微转动一下,转子会自动落在转轴上。
d)将压力传感器和温度探针的电缆插头分别插入炉腔顶上温压连接器的插座内,分别捏住温压插头的尾端,使插头上红点对准插座上的红点,保持垂直方向插入插座,并听到有轻微的“咔嗒”声。
e)选择固有微波消解程序“0”,按“”:运行键
待程序运行结束,主机发出提示音后进入冷却程序,此时冷却风机启动。当温度下降到100℃时,主机会发出鸣叫声,此时表示冷却结束。然后取出转子。
2.2 水样的消解
按水样与硝酸体积比5:1的比例加入硝酸后置电热板上在80℃~90℃条件下加热30min。
3、硅藻提取-真空抽滤(光镜版本)
3.1光镜检验滤膜样品的制备
按消解液与纯水体积比1:5的比例加纯水至消解罐,稀释消解液;
将稀释后同一检材的消解液合并倒入同一抽滤杯(水系膜)中抽滤;
加50mL纯水继续抽滤,使滤膜表面接近中性;
取出滤膜,在电热板上烘干。
4、显微镜观察(光镜版本)
4.1 滤膜透明化处理
取载玻片,在中心滴加2滴~3滴透明化试剂(乙酸-丁香酚混合试剂);
将滤膜置于透明化试剂上;
在滤膜上滴加1滴~2滴透明化试剂,加盖盖玻片。
4.2 光镜检验
采用光学显微镜观察经上述1.1制备的玻片,方法如下:
根据硅藻个体大小采用不同的放大倍数观察、拍照;